| Título: | Desarrollo de los métodos QPCR y Elisa para determinar expresión del gen de Vitelogenina en Pimephales Promelas y su uso como biomarcador de disrupción endócrina en muestras de agua superficial de Uruguay |
| Autores: | KEEL, KAREN, Autor ; DIANA MÍGUEZ CARAMÉS, Autor ; CARNIKIAN, AGUSTIN, Autor ; PARODI, ADRIANA, Autor |
| Tipo de documento: | documento electrónico |
| Editorial: | Montevideo [URUGUAY] : Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU), 2010 |
| ISBN/ISSN/DL: | 64880 |
| Dimensiones: | 1 p. |
| Nota general: | Presentado en: Jornadas de la Sociedad Uruguaya de Biociencias (SUB). (2010 mayo 28-30 : Piriápolis-Uruguay) |
| Langues: | Español |
| Clasificación: | |
| Resumen: | Los disruptores endócrinos (Endocrine Disruption Compounds - EDCs) son sustancias químicas, naturales o artificiales, exógenas al organismo que tienen la capacidad de alterar la homeostasis del sistema endocrino-reproductivo. Dentro de los mismos, el mayor interés se ha establecido sobre los compuestos estrogénicos, los cuales alteran el sistema hormonal induciendo trastornos neurológicos y efectos adversos sobre el desarrollo sexual y la reproducción. Tienen grandes impactos negativos sobre la capacidad reproductiva de una amplia cantidad de especies de peces, observándose efectos como la disminución de fertilidad, de la aptitud sexual, de la producción de esperma y la feminización de peces machos. La meta de los últimos años ha sido desarrollar un indicador molecular específico para el diagnóstico de la exposición de organismos a concentraciones perjudiciales medioambientales de sustancias estrogénicas. Se ha descripto la expresión del gen de la vitelogenina (Vg) en larvas y machos adultos de peces Fathead minnow (Pimephales promelas) como un indicador de exposición a xenoestrógenos. Dicho indicador permite la medida inmediata del potencial estrogénico acumulado en los sistemas acuáticos y la evaluación no solo de compuestos estrogénicos conocidos, sino también de mezclas complejas. La vitelogenina es indetectable en plasma de hembras inmaduras y en machos debido a que el estrógeno circulante es insuficiente, sin embargo el hígado es capaz de producir y secretar vitelogenina al torrente sanguíneo en respuesta a estrógeno exógeno o agonistas del mismo. Por lo tanto la detección de la presencia de un compuesto estrógenico puede llevarse a cabo midiendo la expresión de vitelogenina en un individuo macho. En base a tales observaciones, advertimos la necesidad de poner a punto técnicas que permitan con facilidad y rapidez verificar posibles efectos estrogénicos en aguas de nuestro país. Para ello proponemos desarrollar los métodos ELISA y PCR real time, para evaluar la expresión del gen de Vg y realizar una compararación de ambos métodos. Con este fin se expusieron Pimephales promelas adultos de ambos sexos a muestras de agua durante 21 días, luego los peces fueron sacrificados y se les extrajo el hígado. A partir de extractos proteicos obtenidos de hígado, se evaluó la expresión de Vg mediante un kit ELISA específico para Pimephales promelas de biosense, y a partir de ARN total de hígado, se evaluó la transcripción del gen de Vg por medio de RT-PCR en tiempo real utilizando Cyber green como fluoróforo. En el presente trabajo se muestran la puesta a punto de los métodos antes mencionados y los resultados preliminares obtenidos para cada uno de ellos. |
| Creative Commons : | CC BY-NC-ND |
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